文蛤病原菌(溶藻弧菌)的分离与性状及病文蛤组织的电镜观察

近年来,江苏南部沿海在8～10月份常发生文蛤大批死亡,从病文蛤体内分离到病原菌,经人工感染试验得到证实。病原菌为革兰氏阴性短杆菌,以极生单鞭毛运动,在TCBS琼脂平板上形成黄色大菌落,在固体培养基上能游动。发酵葡萄糖产酸不产气,精氨酸—碱反应阴性,赖氨酸、鸟氨酸脱羧阳性。在无盐蛋白胨水中不能生长,在10％NaCl 蛋白胨水中生长良好。在43℃下能正常繁殖。对弧菌抑制剂0/129(150μg)和新生霉素(5μg)敏感,被鉴定为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus Sakazaki)。病文蛤超薄切片的电镜观察表明,肠上皮及肝组织被细菌侵袭。病原菌在肠上皮细胞质中增生,形成上百个细菌的集群。上皮细胞核变形,被挤向一侧,线粒体内嵴模糊,部分上皮细胞微绒毛的结构被严重破坏,细菌周围的组织被腐蚀成空斑。     

文蛤消化道粘液细胞研究

运用组织学和组织化学染色方法，在光镜水平上研究了文蛤消化道粘液细胞的类型，分布与组化特性。H.E染色法显示，粘液细胞主要存在于消化道上皮组织中，仅唇瓣结缔组织中发现有少量的粘液细胞，ABPAS染色法显示；文蛤消化道粘液细胞主要分为4种类型：Ⅰ型，呈红色，AB阴性，PAS阳性，含有中性粘液物质，Ⅱ型：呈蓝色，AB阳性，PAS阴性，含有酸性粘液物质；Ⅲ型：AB和PAS均呈阳性，但PAS阳性较强，两种粘液物质均含有，但中性粘液物质含量多；Ⅳ型：AB和PAS均呈阳性，但AB阳性较强，两种粘液物质均含有，但酸性粘液物质含量多，不同部位粘液细胞的类型，数量不同，唇瓣粘液细胞的数量较少，食道含有大量的粘液细胞，胃，肠，直肠中粘液细胞的数量以胃中最少，肠次之，直肠最多，AB-PAS（AB pH1.0）染色法显示：粘液细胞所含酸性粘液物质包括硫酸性粘液物质和涎酸性粘液物质，且唇瓣和直肠中粘液细胞所含的涎液酸性粘液物质比硫酸性粘液物质多，酶组化研究结果显示，肠粘液细胞具有弱酸性磷酸酶，弱碱性磷酸酶活性。     

五种海洋生物葡萄糖磷酸变位酶和磷酸葡萄糖异构酶的同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳方法对虾夷马粪海胆（Strongylocentrotus intermedius）、刺参（Apostichopus japonicus Selenka）、半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）、文蛤（Meretrix meretrix）和虾夷扇贝（Pecten yessoensis）不同组织中的葡萄糖磷酸变位酶（PGM）和磷酸葡萄糖异构酶（GPI）进行了检测分析。结果发现，虾夷马粪海胆肌肉组织和成熟性腺组织中的PGM有较强的表达活性和表达位点差异，两种组织中GPI活性稍差。刺参的肠道组织和肌肉组织只有PGM和GPI表达活性的差异，而无位点差异。半滑舌鳎肌肉组织检测到两个PGM位点，三个GPI位点。文蛤闭壳肌组织PGM表现出非常高的多态性，而GPI表现为单态。虾夷扇贝闭壳肌组织的PGM和GPI各只检测到一个位点，遗传变异程度比较低。以PGM和GPI为指标，对我国北方5种重要海水养殖品种的同工酶遗传变异水平和其它相关遗传参数进行了分析，对群体遗传结构可能的变化规律以及与某些性状的相关性进行了探讨，这些参数对它们的遗传选育有一定的指导作用。     

南宁市售文蛤中弧菌的分离鉴定

【目的】对从南宁市售文蛤体内分离获得的待测菌株进行鉴定,为掌握了解广西文蛤产品中弧菌科细菌的带菌情况提供参考依据。【方法】用硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基（TCBS）从南宁海鲜市场的文蛤中分离获得4株细菌,观察其菌落形态,对分离菌株进行生理生化特性鉴定及16SrRNA基因序列进行克隆、测序,运用DNASTAR中的MegAlign软件进行序列分析,并构建系统进化树。【结果】TCBS培养基30℃培养24h后,菌株No．8和No．9生长良好,形成直径2mm左右、圆形、隆起的菌落;菌株No．10、No．11生长不良,部分形成直径1mm左右、圆形、隆起的黄色菌落。菌株生化鉴定结果表明,菌株No．8、No．9在无盐蛋白胨水中不生长,且不能分解葡萄糖;而菌株No．10、No．11可在无盐蛋白胨水中生长,且能分解葡萄糖并产气。16SrRNA序列系统进化树显示,菌株No．8与副溶血弧菌聚集为一个分支,No．9与河流弧菌聚集为一个分支,No．10、No．11则分别与斑点气单胞菌、嗜水气单胞菌聚集为一个分支。综合表型和分子特征可知,菌株No．8为副溶血弧菌,No．9为河流弧菌,No．10为斑点气单胞菌、No．11为嗜水气单胞菌。细菌药敏结果显示,4株分离菌株对四环素、环丙沙星、先锋噻肟、先锋必均表现为高度敏感。【结论】南宁市售文蛤产品主要是污染了弧菌属及气单胞菌属细菌,生产上可选用四环素、环丙沙星、先锋噻肟、先锋必等药物进行防治。     

文蛤转录组中微卫星位点生物信息分析#br#

采用生物信息学方法分析了文蛤(Meretrix meretrix)转录组中微卫星序列(简单重复序列,simple sequence repeat)的分布规律。结果表明:在文蛤转录组SSR中,单碱基重复序列的数量最多,有3001个;其次为三碱基和四碱基重复序列,分别为2254和2200个;二碱基重复序列1052个;五碱基重复序列332个;六碱基重复序列最少,仅13个。文蛤转录组SSR共包含26种重复基元,其中优势基元为单碱基重复A/T有2809个,其次为三碱基重复AAC/TTG有907个,四碱基和二碱基重复中的AAAC/TTTG和AT/TA分别有588和561个,说明文蛤转录组微卫星位点的分布对A/T具有偏好性。文蛤完整SSR的平均长度为18.34 bp,长度分布在12~20 bp,约占41%。研究结果将为研究文蛤SSR标记开发、群体遗传多样性、遗传连锁图谱、种质资源鉴定和分子遗传育种等后续研究提供基础数据。     

Induction of Apoptosis, G0/G1 Phase Arrest and Microtubule Disassembly in K562 Leukemia Cells by Mere15, a Novel Polypeptide from Meretrix meretrix Linnaeus

Mere15 is a novel polypeptide from Meretrix meretrix Linnaeus with cytotoxicity in solid cancer cells. In this study, we investigated its activity on human K562 chronic myelogenous leukemia cells. Mere15 inhibited the growth of K562 cells with IC₅₀ values of 38.2 μg/mL. Mere15 also caused concentration dependent induction of apoptosis, with overproduction of reactive oxygen species and loss of mitochondrial membrane potential. Moreover, Mere15 arrested cell cycle progression at G₀/G₁ phase of K562 cells in a concentration dependent manner. In addition, Mere15 caused the disassembly of the microtubule cytoskeleton in K562 cells and inhibited the polymerization of tubulin in a cell free system via interaction with tubulin. We concluded that Mere15 was cytotoxic to K562 leukemia cells and the cytotoxicity was related to the apoptosis induction, cell cycle arrest and microtubule disassembly. These results implied that Merer15 was a broad spectrum anticancer polypeptide, not only cytotoxic to various solid cancer cells but also to the chronic myelogenous leukemia cells. Mere15 may have therapeutic potential for the treatment of leukemia.     

两种壳色文蛤壳形态性状对活体质量的影响

为了解文蛤Meretrix meretrix壳形态性状对活体质量的影响,获得具有优良遗传性状的群体,以经过7年群体选育的F_4代黑斑文蛤和红色文蛤为试验对象,采用相关性分析、主成分分析和通径分析等统计方法,对两种文蛤进行了壳长(X_1)、壳高(X_2)、壳宽(X_3)对活体质量(Y)的影响分析,建立了壳形态性状对活体质量影响的最优回归方程。结果表明:两种文蛤表型性状差异不大(P0.05),但壳性状对活体质量的主要影响因子不同,壳高和壳宽是决定黑斑文蛤活体质量的主要因素,而壳长是决定红色文蛤活体质量的主要因素(P0.01);多元逐步回归分析得到最优回归方程Y_(黑斑)=-8.308+0.361X_2+0.391X_3,Y_(红色)=-8.389+0.500X_1,回归关系和偏回归系数均达极显著水平(P0.01)。本研究结果对生产实践中两种文蛤的选育具有较高的参考价值。     

文蛤红色选育系幼贝滤水率响应面法分析

为比较文蛤红壳色选育系与江苏野生群体在不同条件下滤水率的差异并找出文蛤最佳滤水率条件,采用了试验生态学方法和响应面法对文蛤红壳色选育系幼贝进行滤水率的研究。试验结果显示,在一定范围内,文蛤幼贝滤水率随盐度、温度和藻类密度的增加而增大,超过一定范围,幼贝滤水率随盐度、温度和藻类密度的增加而减小;在同等条件下,文蛤红壳色选育系幼贝与野生群体滤水率无显著差异,但文蛤红壳色选育系生长速率显著高于野生群体;通过响应面法优化,文蛤红壳色选育系幼贝的最佳滤水率条件为:盐度21.82、温度27.40℃、藻类密度9.96×10^4个/mL,此条件下滤水率的预测值为1.62 mL/(个·min)。     

文蛤工厂化育苗技术

1998年至2001年就文蛤亲贝能肥促熟、诱导产卵、孵化、幼虫和稚贝培育、稚贝生态习性等开展研究。研究发现，养殖文蛤可以通过室内控温强化培育促熟，比自然海区提早近2个月；通过阴干-充气的催产方法，能使亲贝集中大批排放精卵。在水温26-32℃，pH7.8-8.5，盐度15-30的条件下，幼虫生长及变态最快。试验结果表明：采用无附着基质的方法进行采苗及稚贝培育是可行的；文蛤稚贝对干露、海水盐度、温度、pH、氨氮等具有较强的耐受性，适应范围：海水盐度9.6-32,水温4-34℃，pH7.0-8.5，在pH=7.9时，能忍受10mg/L的总氨氮浓度。1999年至2001年，共育出1.02-1.75mm（壳长）的文蛤稚贝2.2亿颗，单位面积出苗28.01-44.60万颗/m^2，达到产业化的要求。     

文蛤稚贝生产性室内越冬暂养试验

2000年10月－2001年4月，在盘山县水产局双良公司的1500m^3水体育苗室内，将30个底面积各为22.8m^2的水泥池作为文蛤稚贝越冬培育池，10个相同面积的水泥池作为水处理池，投放体长0.56-1.24mm的文蛤稚贝4.3808亿枚，在平均水温4℃、pH8.15、溶解氧7mg/L以上、盐度26、白天照度1000lx的试验条件下，进行生产性室内水泥池越冬培育试验。结果越冬培育的文蛤稚贝成活数量达3.6253亿枚，成活率为82.8%，文蛤稚贝在越冬培育过程中，其体长不增长，不摄食，亦不运动。